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抗肿瘤药物体外筛选

 目前 , 化学治疗仍然是治疗恶性肿瘤的重要手段之一。 但用于临床的抗 肿瘤药物普遍存在选择性差、 毒副作用大、 肿瘤药物普遍存在选择性差、 毒副作用大、 易产生耐药性等问题 ,寻找 选择性高、 毒副作用小的抗癌药仍然是抗肿瘤新药研发重点。 选择性高、 毒副作用小的抗癌药仍然是抗肿瘤新药研发重点。每年都有大 量的天然提取物以及合成化合物出现 , 因此进行药物初筛是非常重要的一 个环节。 个环节。 常见的抗肿瘤药物体外筛选方法主要有: MTT比色法、SRB法、 常见的抗肿瘤药物体外筛选方法主要有: 比色法、 法 比色法 CCK-8法、酸性磷酸酶法、ATP生物发光法等。由于 生物发光法等。 比色法具有简便 法 酸性磷酸酶法、 生物发光法等 由于MTT比色法具有简便 比色法 快速、灵敏、重复性高、无放射污染、有较好的临床符合性等优点, 、快速、灵敏、重复性高、无放射污染、有较好的临床符合性等优点,成 为目前最常用的体外肿瘤药敏试验方法。该方法的原理:四甲基偶氮唑盐, 为目前最常用的体外肿瘤药敏试验方法。该方法的原理:四甲基偶氮唑盐, 即 MTT,为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料。可作用于活细胞线粒 ,为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料。 体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下四氮唑环开裂,生成 体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 的作用下四氮唑环开裂, 的作用下四氮唑环开裂 蓝紫色的甲臜 结晶。 蓝紫色的甲臜( formazan)结晶。由于死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将 结晶 由于死细胞中琥珀酸脱氢酶消失, MTT还原,因此甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比。还原生成的甲 还原, 还原 因此甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比。 瓒结晶可被二甲基亚砜( 瓒结晶可被二甲基亚砜(DMSO)溶解,利用酶标仪测定 )溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密 处的光密 度OD值,即可反映出活细胞数目。 值 即可反映出活细胞数目。
根据所需浓度,称取一定量的药物, 根据所需浓度,称取一定量的药物,配置 药物母液, 药物母液,于-20℃储存。剩余药品存放在 ℃储存。 630的公用冰箱中,交由相关老师保存,并 的公用冰箱中, 的公用冰箱中 交由相关老师保存, 记录药品名称和剩余数量。 记录药品名称和剩余数量。
    初筛时一般选取3~ 种敏感人癌细胞株 种敏感人癌细胞株, 初筛时一般选取 ~5种敏感人癌细胞株,如 乳腺癌、鼻咽癌、胃癌和宫颈癌。 肺癌 、乳腺癌、鼻咽癌、胃癌和宫颈癌。活 性明显的化合物可进一步扩大瘤谱进行研究。 性明显的化合物可进一步扩大瘤谱进行研究。 如果化合物仅对一种特定的肿瘤如肺癌有效, 如果化合物仅对一种特定的肿瘤如肺癌有效, 则可采用更多种类的肺癌细胞系作进一步研 究。
    冻存前3代以内的细胞, 冻存前 代以内的细胞,并且冻存数目要大于或等 代以内的细胞 于复苏数目,以保证有充足数量的冻存细胞。 于复苏数目,以保证有充足数量的冻存细胞。冻存 方法:将冻存管放入程序降温盒中,旋紧盒盖, 方法:将冻存管放入程序降温盒中,旋紧盒盖,放 个小时, 入-80℃冰箱。至少放置 个小时,才能放入液氮中 ℃冰箱。至少放置4个小时 保存。程序降温盒使用5次更换一赐尼斯人app毂 次更换一赐尼斯人app毂肌 保存。程序降温盒使用 次更换一赐尼斯人app毂肌
    培养箱培养条件为37℃ 浓度为5%。 培养箱培养条件为 ℃,CO2浓度为 。 培养箱门要轻开轻关。打开门之前用75% 培养箱门要轻开轻关。打开门之前用 的酒精对手及胳膊消毒; 的酒精对手及胳膊消毒;门处于打开状态 时不能对着培养箱里说话(戴口罩)。 时不能对着培养箱里说话(戴口罩)。 威尼斯人app要在老师的监督下打开, 威尼斯人app要在老师的监督下打开,并做好使 用记录。注意定期检查威尼斯人app内液氮量, 用记录。注意定期检查威尼斯人app内液氮量, 及时添加。 及时添加。

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